Как отвар Лю Хуану в сочетании с астаксантином влияет на липиды крови у крыс с атеросклерозом?

 Рост заболеваемости сердечно-сосудистыми заболеваниями является одной из основных причин повышения уровня смертности в мире. По данным отчета China Cardiovascular Health and Disease Report 2021, смертность от сердечно-сосудистых заболеваний по-прежнему составляет наибольшую долю смертей среди городских и сельских жителей. Атеросклероз (АС) является одной из основных причин нарушения коронарного кровообращения. В настоящее время для профилактики и лечения атеросклеротических сердечно-сосудистых заболеваний широко используются синтетические препараты, такие как статины, никотиновая кислота, блокаторы рецепторов ангиотензина, антиоксиданты, антитромбоцитарные средства и антикоагулянты, однако их токсичность и побочные эффекты в определенной степени ограничивают их клиническое применение. В последние годы традиционная китайская медицина (ТКМ) постепенно привлекает широкое внимание благодаря таким своим преимуществам, как безопасность, эффективность, низкая токсичность и побочные эффекты, а также низкая стоимость и удобство, и поиск эффективных и безопасных ТКМ стал новым направлением в лечении АГ.

 

Лю Хуану - это целая трава Artemisia absinthium, семейство Asteraceae, горькая, холодная, на селезенку, желудок, печень, желчный пузырь меридиан, с циркуляцией крови и менструации, разогнать застой крови и облегчить боль, остановка кровотечения и отеки, устранение пищи и удаления застоя и так далее, и часто используется для застоя менструации и менструального закрытия, послеродовые боли в животе, синяки, травматические кровотечения, карбункулы, опухшие и ядовитые, и боли в животе пищевода и застоя, и так далее [1]. Астаксантин, также известный как астаксантин, астаксантин, в 1933 году впервые из креветок, крабов и других водных продуктов извлекли некие фиолетово-красные кристаллы, позже идентифицированные как вид астаксантина, тесно связанный с каротиноидами, поэтому названный астаксантином [2]. Астаксантин является одним из самых мощных природных антиоксидантов, а его свойства повышать иммунитет и предотвращать сердечно-сосудистые и цереброваскулярные заболевания получили широкое признание[3 - 4] . В настоящем исследовании мы изучили влияние астаксантина в сочетании с отваром Лю Хуану на липиды крови в крысиной модели атеросклероза, чтобы создать экспериментальную основу для его клинического применения.

 

1 Материалы и методы

1 . 1 Экспериментальные животные

60 здоровых самцов крыс SD класса SPF, массой тела 160-180 г, приобретенных у биотехнологической компании Chunying из провинции Хэнань (лицензия №:

SCXK 豫 2022 - 0001 ), содержались в стандартном помещении для лабораторных животных и были самодостаточны.

Эксперименты проводились после 1 недели акклиматизации при естественном освещении, температуре 20~23℃, относительной влажности 40%~60%, свободном доступе к пище и воде.

 

1 . 2 Корм

Основной корм, корм с высоким содержанием жира (2% холестерина + 0,2% желчной соли + 20% сала + 10% сахара и высокое содержание белка) были приобретены у компании Chunyin Biotechnology Company, провинция Хэнань (партия № 202233). 2% холестерина + 0,2% желчной соли + 20% сала + 10% сахара и высокое содержание белка) были приобретены в компании Chunyin Biotechnology Company, провинция Хэнань (партия № 202233).

 

1 . 3 Экспериментальные реагенты и препараты

Отвар Лю хуйну, приготовленный из Лю хуйну, произведенного в Бочжоу, провинция Аньхой, концентрированный в 0,30 г/мл, 0,5 г/мл, 0,5 г/мл, 0,5 г/мл, 0,5 г/мл, 0,5 г/мл.  30 г/мл、0 .  0,30 г/мл, 0,62 г/мл, 1,23 г/мл. 23 г/мл жидкости. Астаксантин был приобретен у Shandong Gukang Biological Engineering Co. Триглицериды (ТГ), общий холестерин (ОХ), холестерин липопротеинов низкой плотности (ЛПНП) (ЛПНП-С) и общий холестерин (ОХ) были приобретены у Qilu Pharmaceutical Co.

Наборы для определения холестерина липопротеинов низкой плотности (ЛПНП - С) и холестерина липопротеинов высокой плотности (ЛПВП - С) были приобретены в компании Shanghai Yuanye Biotechnology Co.

Лимитед" (партия № 202203).

 

1 . 4 Экспериментальная аппаратура и оборудование

Автоматический биохимический анализатор B200V (Nanjing Innova), автоматический этикетировщик ферментов 680 (Shanghai Bole), ультрафиолетовый спектрофотометр T6 New (Shanghai Yidian Analytical Instrument Co., Ltd.), электронные весы (XJ320M, Shanghai Jingke Tianmei Scientific Instrument Co., Ltd.).

 

1 . 5 Создание модели крысы AS

Шестьдесят крыс были случайным образом разделены на пустую группу, модельную группу, группу аторвастатина и группу астаксантина в низкой, средней и высокой дозах в сочетании с отваром Лю Хуану, по 10 крыс в каждой группе. Крыс из пустой группы кормили основным кормом в течение всего эксперимента, а крыс из остальных пяти групп (т.е. группы моделирования) кормили кормом с высоким содержанием жира в течение всего эксперимента. В течение периода моделирования крысам в группе моделирования вводили внутрибрюшинно VD3 в дозе 600 000 МЕ/кг в течение первой недели.  Во время периода моделирования крысам из группы моделирования внутрибрюшинно вводили VD3 в дозе 600 000 МЕ/кг на первой неделе и 100 000 МЕ/кг на третьей, пятой и седьмой неделях соответственно. Через 8 недель эксперимента из каждой холостой и группы моделирования случайным образом отобрали по 2 крысы и измерили уровень липидов в сыворотке крови путем забора крови из внутрибрюшинной вены, а грудную аорту перехватили для иммуногистохимического исследования патологических участков для подтверждения успешности процесса моделирования.5

 

1 . 6 Распределение лекарств по группам и их введение

После успешного моделирования крысам каждой группы вводили препараты через гаваж. В группах с низкой, средней и высокой дозой отвар Лю Хуану (45 мг/кг, 90 мг/кг, 180 мг/кг) и астаксантин (15 мг/кг, 30 мг/кг, 60 мг/кг) вводили через гаваж соответственно; в группе с аторвастатином - измельченные таблетки аторвастатина кальция (1,05 мг/кг) и физраствор (1,5 мг/кг), и крысы в группе с аторвастатином получали их через гаваж. Группа аторвастатина получала измельченные таблетки аторвастатина кальция (1,05 мг/кг) и физраствор (1,33 мл/кг). В группе аторвастатина таблетки аторвастатина кальция (1,05 мг/кг) и физраствор (1,33 мл/кг) вводили через гаваж; в холостой и модельной группах через гаваж вводили такую же дозу физраствора. Холостая группа и модельная группа получали одинаковую дозу физраствора через гаваж один раз в день в течение 4 недель подряд[6] .

 

1 . 7 Индикаторы обнаружения

Массу тела каждой крысы измеряли и регистрировали в конце каждой недели в течение всего эксперимента. После последнего введения препарата каждая крыса была обезболена внутрибрюшинной инъекцией 10% хлоралгидрата (0,3 мл - 100 г-1 ). После последнего введения препарата каждая крыса была обезболена внутрибрюшинной инъекцией 10% хлоралгидрата (0,3 мл - 100 г-1 ), конечности были зафиксированы, брюшная полость была вскрыта, и кровь была собрана из брюшной аорты через сосуд для сбора крови с прокоагулянтом.

15 мин. Супернатант извлекали и тестировали в соответствии с инструкцией к набору ELISA.

В каждой группе определяли сывороточные уровни ТК, ТГ, ЛПНП и ЛПВП, рассчитывали атеросклеротический индекс (АИ) = [общий холестерин крови (ТК) - липопротеин высокой плотности (ЛПВП)]/липопротеин высокой плотности (ЛПВП).

 

1 . 8 Статистические методы

Данные анализировались с помощью программного обеспечения SPSS 25.0. Для анализа данных использовалось программное обеспечение SPSS 25.0. Измерения выражались как среднее ± стандартное отклонение (x- ±s), а сравнение данных между группами проводилось с использованием

Использовался односторонний дисперсионный анализ (One - Way, ANOVA), и два сравнения между группами анализировались методом наименьших значимых различий (LSD) или T2-анализом Тамхана, при этом (P < 0 . 05) как статистически значимые различия.

 

2 Результаты

2 . 1 Влияние отвара Лю Хуану в сочетании с астаксантином на массу тела крыс с атеросклерозом

Как показано в таблице 1, в начале эксперимента (0 неделя) не было разницы в массе тела крыс в каждой группе (P > 0,05), а по мере продолжения эксперимента масса тела крыс в каждой группе увеличивалась. В начале эксперимента (0 неделя) не было разницы в массе тела между группами (P > 0,05), а по мере продолжения эксперимента масса тела крыс во всех группах увеличивалась. 1 ~ 4 недели масса тела крыс в модельной группе, группе аторвастатина и низких, средних и высоких доз отвара Лю Хуану в сочетании с астаксантином увеличивалась больше, чем в пустой группе, но различия не были статистически значимыми (P > 0,05). 05), в период с 6 по 12 неделю прирост массы тела крыс во всех группах был выше, чем в холостой группе, и разница была статистически значимой (P < 0,05). 05). По сравнению с модельной группой, масса тела крыс в группе аторвастатина и группах с низкой, средней и высокой дозой астаксантина в сочетании с отваром Лю Хуану снизилась на сроке от 8 до 12 недель, но различия не были статистически значимыми (P > 0,05). 05).

 

2 . 2 Влияние отвара Лю хуину в сочетании с астаксантином на уровень ТК, ТГ, ЛПНП, ЛПВП и ИИ в сыворотке крови крыс с атеросклерозом

Как показано в таблице 2, по сравнению с группой сравнения, уровни ТК, ТГ, ЛПНП и АИ в сыворотке крови были повышены, а уровни ЛПВП - понижены в группе модели, группе аторвастатина и группах низких, средних и высоких доз отвара Liu Huan Nu в сочетании с астаксантином, и различия были статистически значимыми (P < 0,01 или P < 0,01). Разница была статистически значимой (P < 0,01 или P < 0,05). Разница была статистически значимой (P < 0,01 или P < 0,05). По сравнению с модельной группой, сывороточные уровни ТК, ТГ, ЛПНП и ИИ снизились, а ЛПВП повысились в группах с низкой, средней и высокой дозой отвара Лю Хуану в сочетании с астаксантином дозозависимым образом, со статистически значимыми различиями в группах со средней и высокой дозой (P < 0,01 или P < 0,05). Разница между группами средней и высокой дозы была статистически значимой (P < 0,01 или P < 0,05). Разница между группами со средней и высокой дозой была статистически значимой (P < 0,01 или P < 0,05), в то время как разница между группами с низкой дозой не была статистически значимой (P > 0,05). В группе низких доз разница не была статистически значимой (P > 0,05). По сравнению с группой аторвастатина в группах низкой, средней и высокой дозы отвара Лю Хуану в сочетании с астаксантином повысились сывороточные уровни ТК, ТГ, ЛПНП, АИ и ЛПВП, а уровень ЛПВП снизился дозозависимым образом, причем в группах низкой и средней дозы.

Разница была статистически значимой (P < 0 . 01 или P < 0 . 05), в то время как в группе высоких доз разница не была статистически значимой (P > 0 . 05).

 

3 Обсуждение

Атеросклероз является наиболее распространенной клинико-патологической основой заболеваний периферических сосудов и цереброваскулярных заболеваний, основной причиной которых является нарушение липидного обмена. Длительное употребление большого количества жиров приводит к гиперлипидемии, которая вызывает утолщение стенки интимы, сужение просвета и постепенное снижение местного кровотока по мере прогрессирования заболевания, что легко приводит к недостаточному кровоснабжению сердечно-сосудистых и цереброваскулярных сосудов, вызывая ряд сердечно-сосудистых и цереброваскулярных заболеваний с различными серьезными последствиями и даже угрожая жизни пациентов[7] . В настоящем исследовании мы использовали витамин D3 в сочетании с диетой с высоким содержанием жиров для создания крысиной модели атеросклероза. Сама по себе диета с высоким содержанием жиров может только вызвать отложение липидов у крыс, но трудно вызвать образование бляшек AS и поражения, подобные тем, что наблюдаются у людей. Многочисленные исследования показали, что стенки кровеносных сосудов людей с АС содержат большое количество кальция, который положительно коррелирует со степенью поражения коронарных артерий. Витамин D3, как индуктор кальция, может способствовать поглощению кальция, повреждать эндотелий стенки артерий, нарушать его целостность, способствовать инвазии липидов и усугублять повреждение стенки сосудов, а затем в сочетании с отложением кальция вызывать дегенерацию гладкомышечных клеток, тем самым ускоряя поражение артерий и образование бляшек8 . Витамин D3 в сочетании с рационом с высоким содержанием жиров обладает такими преимуществами, как простота, высокий процент успеха и хорошая стабильность при моделировании атеросклероза у крыс. В настоящем исследовании успех модели был подтвержден сравнением срезов грудной аорты крыс из группы холостого опыта и группы моделирования.

 

Гиперлипидемия является важным фактором риска развития атеросклероза, а нарушения липидного обмена, связанные с повышением уровня ТК, ТГ, ЛПНП и снижением уровня ЛПВП, тесно связаны с возникновением и прогрессированием атеросклероза. Среди всех видов липидов холестерин считается ключевым фактором развития атеросклероза[9] . Установлено, что при избытке холестерина в крови ЛПНП-С откладываются в субэндотелиальном пространстве сосудов, образуя окисленный липопротеин низкой плотности (окс-ЛПНП), который может вызывать дисфункцию эндотелия через провоспалительные факторы в сосудистых клетках, а моноциты концентрируются в эндотелии[10] и дифференцируются в макрофаги, которые поглощают липопротеины, образуя пенистые клетки, что в конечном итоге приводит к образованию жировых полос, которые становятся ранней стадией атеросклероза. Образование жировых полос является признаком раннего атеросклероза, а по мере развития заболевания жировые полосы постепенно формируют атеросклеротические бляшки [11]. Атеросклеротический индекс (АИ) обычно используется для оценки степени атеросклероза, и чем меньше АИ, тем меньше вероятность развития сердечно-сосудистых и цереброваскулярных заболеваний.

 

Результаты настоящего исследования показали, что после применения отвара Лю Хуану в сочетании с астаксантином у крыс дозозависимым образом снизились сывороточные уровни ТК, ТГ, ЛПНП и АИ и повысился уровень ЛПВП, причем разница между группами со средней и высокой дозой была статистически значимой (P < 0,01 или P < 0,01, соответственно). 01 или P < 0,05), в то время как в группе с низкой дозой разница была статистически значимой (P < 0,05). Различия между группами средней и высокой дозы были статистически значимыми (P < 0,01 или P < 0,05), в то время как различия между группами низкой дозы не были статистически значимыми (P > 0,05). Разница между средней и высокой группами была статистически значимой (P < 0,01 или P < 0,05), в то время как разница между низкой группой не была статистически значимой (P > 0,05). В то же время, увеличение массы тела крыс уменьшилось, что указывает на наличие гиперлипидемии у крыс AS, и сочетание отвара с астаксантином было способно снизить уровень TC, TG, LDL-C и AI в сыворотке крови и увеличить уровень HDL-C дозозависимым образом у крыс AS, и улучшить изменения уровня липидов сыворотки и массы тела, вызванные нарушениями липидов крови, и эффект группы с высокой дозой был еще лучше.

 

В заключение следует отметить, что отвар Лю хуину в сочетании с астаксантином способен дозозависимым образом улучшать уровень липидов у крыс, находящихся в состоянии AS.

 

Ссылки:

[1] Lin Yuanmao, Shi Rongcong, Sun Chengtai, et al. Сетевой фармакологический анализ активных ингредиентов и их фармакодинамического механизма Северного Лю Фу Ню[J] . Руководство по китайской медицине, 2020 , 26(10) :46 - 51 .

[2] Shen Cheng, Wang Long, Wang Hei. Прогресс исследований астаксантина при атеросклеротических сердечно-сосудистых заболеваниях[J] . Medical Review, 2018 , 24(3) :417 -421 .

[3] ZHANG Kelian, GUO Jingyi, DAI Ruozhu. Исследование гиполипидемического, антиоксидантного и противовоспалительного эффектов астаксантина на атеросклероз у нокаутных мышей ApoE [J] . Китайский журнал иммунологии, 2020 , 36(7) :794 - 798 .

[4] Hu Yanwu, Yang Wenxin, Bao Xiaoxue, et al. Механизм действия пуэрарина в улучшении дислипидемии и воспалительной реакции у атеросклеротических крыс[J] . Медицинский справочник, 2021 , 40(2) :175 - 179 .

[5] Shi Hao, Huang Shilong, Zhang Mengke, et al. Эффекты проантоцианидинов в сочетании с витамином Е на липиды крови и антиоксиданты у атеросклеротических крыс[ J] . Китайский журнал геронтологии, 2019 , 39(4) :889 - 893 .

[6] Wang Shuqi, Li Hui, Yang Xiaoqiang, et al. Исследовательский прогресс в создании модели атеросклероза на крысах[ J] . Вестник китайской медицины, 2020 , 17(12) :45 - 48 , 68 .

[7] GUO Xiaolei, WANG Lingling, XIAO Zhijiao, et al. Влияние добавления и вычитания липидоснижающей и эмболизирующей формулы на липиды крови, эндотелиальную функцию сосудов и факторы воспаления у пациентов с каротидным атеросклерозом[J] . Современный журнал интегративной медицины, 2022 , 31(8) :1067 - 1071 .

[8] Wang Shuqi, Li Hui, Yang Xiaoqiang, et al. Исследовательский прогресс в создании модели атеросклероза на крысах[ J] . Вестник китайской медицины, 2020 , 17(12) :45 - 48 , 68 .

[9]ARNOLD N , KOENIG W. Atherosclerosis as an inflammatory disease - pathophysiology , clinical relevance and therapeutic implications [J] . Dtsch Med Wochenschr , 2019 , 144(5) :315 - 321 .

[10] OU H C , CHOU W C , HUNG C H , et al . Galectin - 3 усугубляет ox - LDL - индуцированную эндотелиальную дисфункцию через LOX - 1 опосредованный сигнальный путь [J] . Environ Toxicol , 2019 , 34(7) :825 - 835 .

[11] Feng Yingyin, Gao Xiao, Song Jinyu, et al. Исследование взаимосвязи между гиперлипидемией и каротидной атеросклеротической бляшкой[J] . Медицинская информация, 2022 , 35(13) :89- 93 .