Как масло антарктического криля повышает биодоступность астаксантина?

 Антарктический криль (Euphausia superba) широко распространен в водах Антарктики, его биомасса составляет от 6,5 до 1 млрд т [1], это огромный объем ресурсов и огромный потенциал для создания второго морского рыбного промысла Китая. В последние годы ресурсы шельфа истощаются, ситуация мрачная, и активное освоение пелагических биологических ресурсов стало важным стратегическим выбором для развития морского рыболовства Китая. Антарктический криль является крупнейшим видом биологических ресурсов в Южном океане, и ускорение его разработки и использования имеет огромное значение.

 

Китайская промышленность по переработке антарктического криля начала развиваться поздно, конкурентоспособность ключевых технологий слаба, разнообразие продуктов с высокой добавленной стоимостью незначительно, а движущая сила промышленного развития недостаточна [2]. Ускорение разработки серии продуктов с высокой добавленной стоимостью является ключом к развитию индустрии переработки антарктического криля.

Масло антарктического криля - это добыча антарктического криля, концентрация, фильтрация и другие процессы производства нефтепродуктов, богатых фосфолипидами EPA/DHA, астаксантином и другими активными ингредиентами [3], по сравнению с традиционным рыбьим жиром (триглицерид EPA/DHA), оно обладает лучшей физиологической эффективностью в регулировании липидного обмена/обмена глюкозы [4-6], торможении воспалительной реакции [6], улучшении функции нервных клеток [7-8] и так далее. На международном уровне на основе масла антарктического криля в сочетании с конъюгированной линолевой кислотой, коэнзимом Q10, витамином D, пробиотиком Lactobacillus reuteri и другим функциональным пищевым сырьем [9-11], позиционирование потребностей различных групп населения в разработке производных функциональных продуктов стало основным направлением коммерческого развития антарктического криля. Рыночная стоимость масла антарктического криля и ряда производных продуктов из него достигла сотен миллионов долларов, что напрямую стимулирует стремительное развитие международной крилевой индустрии. Поиск подходящего функционального пищевого сырья, разработка инновационных производных масла антарктического криля, повышение конкурентоспособности продукции становятся важным направлением развития китайской промышленности по переработке антарктического криля.

 

Астаксантин, как невитамин А, пролипид-растворимый каротиноид, широко распространен в морских продуктах питания, таких как креветки, крабы и микроводоросли, и является самым сильным антиоксидантом, встречающимся в природе[12] . Природный астаксантин существует в свободном или этерифицированном состоянии [13-15], обладает разнообразной физиологической активностью по повышению уровня окислительного стресса в организме, профилактике и лечению сердечно-сосудистых и церебральных сосудистых заболеваний и нейродегенеративных заболеваний [15-16], что привлекло большое внимание в области продуктов питания, функциональных продуктов и биомедицинских продуктов в последние годы. Астаксантин не может синтезироваться в организме и может потребляться только с пищей, однако из-за его гидрофобных свойств уровень его усвоения и утилизации в организме невысок [15, 17]. В настоящее время некоторые исследования указывают на то, что добавление липидов является эффективным способом повышения биодоступности каротиноидов [18-20], что дает идею для разработки функциональных продуктов путем сочетания натуральных экстрактов астаксантина с маслом антарктического криля. Таким образом, целью данного исследования является количественное определение астаксантина в биологических образцах на основе экспериментов по перевариванию и поглощению in vivo, оценка влияния масла антарктического криля на биодоступность натурального астаксантина, подтверждение целесообразности функциональной комбинации масло антарктического криля - астаксантин для разработки новых видов производных масла антарктического криля, создание теоретической базы для разработки продуктов.

 

1 Материалы и методы

1.1 Материалы и реагенты

Крысы-самцы Вистар класса SPF [Разрешение на производство № SCXK (LU) 20140007], масса тела 180~200 г, Qingdao Daren Fucheng Animal Husbandry Co Ltd; экстракт астаксантина из Haematococcus pluvialis [содержание астаксантина (16,0 ± 0,0%)]. 0 ± 0 . (16,0 ± 0,57)%], Yunnan Aerogen Biotechnology Co., Ltd; масло антарктического криля [содержание фосфолипидов (49,8 ± 0,52)г/100 г, содержание астаксантина (188,3 ± 4,71)мг/кг, состав жирных кислот EPA (21,7 ± 0,33)%, DHA (12,5 ± 0,19)%], Qingdao Antarctic Viking Bio-technology Co; Триглицеридный рыбий жир [EPA (21,9±0,56)%, DHA (12,6±0,22)%], Jiangsu Aoqi Marine Biological Engineering Co.

Стандарт астаксантина (чистота ≥95,8 %), Dr. Ehrenstorfer, Германия; метанол, метил-трет-бутиловый эфир и другие хроматографические реагенты, Merck, Германия; соли желчи свиньи, Beijing Solebao Technology Co. Ltd.

 

1.2 Инструменты и оборудование

Жидкостный хроматограф LC-16 (с УФ-детектором Essentia SPD-16), Shimadzu, Япония; колонка YMC-Carotenoid (250 мм × 4,6 мм, 5 мкм), YMC, Япония; высокоскоростной диспергатор T10, IKA, Германия; высокоскоростная охлаждаемая центрифуга Neofuge 15R, Shanghai Lixin Scientific Instruments Co. Ltd.; вакуумная сублимационная сушилка CTFD-10P, Qingdao Yonghe Chuangxin Electronic Technology Co.

 

1.3 Методика проведения экспериментов

1.3.1 Формирование эмульсий для гаважа    

Эмульсию для гаважа готовили по литературной методике [21] и в соответствии с экспериментальной группой. Соответствующие количества экстракта астаксантина из красных водорослей, жира антарктического криля и рыбьего жира взвешивали и добавляли в 0,5% раствор желчной соли свиной желчи, затем обрабатывали ультразвуком в течение 5 мин и гомогенизировали в высокоскоростном диспергирующем гомогенизаторе при 10 000 об/мин в течение 5 мин, чтобы получить равномерно диспергированную эмульсию, т.е. эмульсию для промывания желудка.

 

1.3.2 Группировка и кормление животных     

Крыс-самцов Вистар класса SPF после 1 недели акклиматизации случайным образом разделили на четыре группы: группа холостого контроля, группа астаксантина, группа масла антарктического криля + астаксантин, группа рыбьего жира + астаксантин, по 50 крыс в каждой группе. В соответствии с суточным рационом взрослого человека (жир антарктического криля 2 г/сут или рыбий жир 2 г/сут, астаксантин 12 мг/сут) пересчитывали на дозу для крыс, соответствующую жировую эмульсию давали через гаваж, а группе холостого контроля в качестве контроля давали такое же количество раствора желчных солей свиной желчи. 实验前 12 ч 禁 食 、不 禁 水 ，于 灌 胃 后 0，0,5，1，2，4，8，10，12，16，

После 24-часового наркоза 3% пентобарбиталом натрия и забора крови из брюшной аорты сыворотку отделяли, кишечный тракт (от пилоруса желудка до кончика прямой кишки) отделяли, кишечное содержимое собирали путем промывания физиологическим раствором, тонкую кишку частично рассекали в продольном направлении и соскабливали тонкие кишечные ворсинки. Биологические образцы, такие как сыворотка, тонкие кишечные ворсинки и кишечное содержимое, были заморожены в жидком азоте и помещены в морозильную камеру на -80 ℃ для запасных частей.

 

1.3.3 Определение содержания астаксантина

1.3.3.1 Предварительная обработка образцов  

  Экстракцию астаксантина из биологических образцов проводили по методикам, описанным в [22] - [24], при этом экспериментальная процедура проводилась по возможности вдали от света.

Предварительная обработка образцов сыворотки: возьмите соответствующее количество сыворотки, добавьте 5-кратный объем раствора трихлорметана-метанола (2:1, v/v), экстрагируйте вихрем в течение 1 мин, дайте постоять 5 мин, центрифугируйте при 8000 об/мин в течение 5 мин при 4 ℃, соберите нижний слой растворителя, повторите экстракцию 3 раза, затем объедините экстракционный раствор, профильтруйте через 0,45 мкм мембрану и продуйте досуха под азотом, затем повторно растворите образец с помощью раствора метанола-метилтрет-бутилового эфира (1:1, v/v) и оставьте его для тестирования. Раствор повторно растворяли в растворе метанола-метил-трет-бутилового эфира (1:1, v/v) и оставляли для измерения.

После вакуумной сублимационной сушки ворсинки тонкой кишки измельчали, добавляли раствор трихлорметана-метанола (2∶1, v/v) и экстрагировали вихревым методом в течение 1 мин, затем оставляли на 5 мин, затем центрифугировали при 4 ℃ в течение 5 мин при 8000 об/мин, собирали супернатант и повторяли экстракцию три раза. Экстракты высушивали под азотом, растворяли в метаноле и метил-трет-бутиловом эфире (1∶1, v/v) и оставляли для тестирования.

Предварительная обработка содержимого кишечника: После вакуумной сублимационной сушки содержимое кишечника измельчали, добавляли раствор трихлорметана-метанола (2∶1, v/v) и экстрагировали вихрем в течение 1 мин. После отстаивания в течение 5 мин экстракт центрифугировали при 8000 об/мин в 4 ℃ в течение 5 мин, собирали супернатант, затем экстракцию повторяли три раза, затем экстракты объединяли и фиксировали до 25 мл. 2 мл экстракта переносили в 10-литровую колбу, добавляли 0,5 мл 0,1 моль/л раствора гидроксида натрия в метаноле, закрывали азотом и омыляли при 4 ℃ в течение 12 ч. После нейтрализации оставшегося щелочного раствора 2% раствором фосфорной кислоты в метаноле смесь хорошо перемешивали, затем фиксировали в 10 мл и фильтровали через 0,45 мкм фильтрующую мембрану для измерения.

 

1.3.3.2 Условия хроматографирования[24]      

Колонка: колонка YMC-Carotenoid (250 мм × 4,6 мм, 5 мкм); подвижная фаза A: метанол; подвижная фаза B: метил-трет-бутиловый эфир; подвижная фаза C: 1% раствор фосфорной кислоты; процедура градиентного элюирования приведена в таблице 1. Скорость потока: 1,0 мл/мин; объем инъекции: 20 мкл; длина волны детекции: 474 нм; количественное определение методом внешнего стандарта.

 

1.4 Расчет биодоступности

Площадь под кривой (AUC0-t) рассчитывалась методом трапециевидной площади по кривой содержания астаксантина в сыворотке крови, а величина AUC0-t использовалась для измерения биодоступности астаксантина в различных экспериментальных группах[25-26] .

 

1.5 Обработка данных

Экспериментальные данные представляли как "среднее ± стандартное отклонение", их обрабатывали и проводили статистический анализ с помощью Excel 2016, SPSS Statistic 20 и других программ. Для двусторонних сравнений между различными экспериментальными группами использовался односторонний ANOVA (Tukey), и статистически значимым считалось различие P<0,05.

 

2 Результаты и анализ

2.1 Методика количественного определения астаксантина в биологических образцах

2.1.1 Предел обнаружения и линейный диапазон    

Предел обнаружения (LOD) составил 0,05 мкг/мл при соотношении сигнал/шум (SNR), равном 3. В диапазоне 0,10~5,0 мкг/мл наблюдалась хорошая линейная зависимость между концентрацией астаксантина (X) и площадью пика инструментального отклика (Y), с Y=240735X-7526,3 (R2 = 0,9993), которая может быть точно определена методом внешнего стандарта.

 

2.1.2 Восстановление и точность    

Разделение астаксантина в различных биологических образцах показано на рис. 1. При определенных условиях время пика стандартного астаксантина составило 10,122 мин, и астаксантин был хорошо отделен от других примесей в сыворотке крови крыс, ворсинках тонкого кишечника и содержимом кишечника без помех, с восстановлением 85,24%~110,49% и относительными стандартными отклонениями (ОСО) 2,63%~9,50% (табл. 2 и 3). Относительное стандартное отклонение (RSD) составило 1,06%, когда один и тот же образец был повторен 6 раз. Метод подходит для определения астаксантина в биологических образцах с хорошим восстановлением шипов и высокой точностью.

 

2.2 Изменение содержания астаксантина в биологических образцах

2.2.1 Изменение содержания астаксантина в содержимом кишечника крыс разных экспериментальных групп    

Изменения содержания астаксантина в кишечном содержимом крыс показаны на рис. 2. Содержание астаксантина в кишечном содержимом крыс каждой экспериментальной группы увеличивалось, а затем уменьшалось, достигая пика через 2-4 ч после введения испытуемого вещества через гаваж, а затем постепенно уменьшалось, и очень мало астаксантина обнаруживалось в кишечном содержимом через 12 ч, а затем испытуемое вещество в основном выводилось из пищеварительного тракта через 24 ч. Содержание астаксантина в кишечном содержимом крыс каждой экспериментальной группы увеличивалось, а затем уменьшалось. Через 0,5, 1, 2, 4, 8 и 10 ч содержание астаксантина в кишечном содержимом крыс разных экспериментальных групп существенно различалось (P<0,05). В группе с астаксантином содержание астаксантина достигло максимума через 2 ч (18,1±2,59 мкг), в группе жир антарктического криля+астаксантин - через 4 ч (64,9±9,54 мкг), а в группе рыбий жир+астаксантин - через 2 ч (57,5±4,98 мкг).

 

2.2.2 Изменение содержания астаксантина в ворсинках тонкой кишки крыс в разных экспериментальных группах    

Изменения содержания астаксантина в ворсинках тонкого кишечника крыс представлены на рис. 3. Содержание астаксантина в ворсинках тонкого кишечника крыс постепенно увеличивалось после дачи пищи, достигало максимума в 4 ч, затем постепенно снижалось и практически не обнаруживалось в 16 ч. В 1, 2, 4, 8 и 10 ч наблюдались значительные различия (P<0,05) между разными экспериментальными группами по содержанию астаксантина. Через 1, 2, 4, 8 и 10 ч содержание астаксантина в ворсинках тонкого кишечника крыс в разных экспериментальных группах значительно отличалось (P<0,05). В группе астаксантина пиковое содержание астаксантина в ворсинках тонкого кишечника крыс составило (101,8±25,52) нг; в группе рыбьего жира+астаксантина пиковое содержание астаксантина в ворсинках тонкого кишечника крыс составило (226,7±41,39) нг, что было в 2,23 раза выше, чем в группе астаксантина (P<0,05); в группе жира антарктического криля+астаксантина пиковое содержание астаксантина в ворсинках тонкого кишечника крыс составило (700,2±128,68) нг, что было в 2,23 раза выше, чем в группе астаксантина (P<0,05). (128,68)нг, что в 6,88 раза выше, чем в группе астаксантина (P<0,05), и в 3,09 раза выше, чем в группе рыбьего жира+астаксантина (P<0,05).

 

2.2.3 Изменение содержания астаксантина в сыворотке крови крыс разных экспериментальных групп

Изменения содержания астаксантина в сыворотке крови крыс представлены на рис. 4. Содержание астаксантина в сыворотке крови крыс каждой экспериментальной группы начало медленно увеличиваться через 0,5 ч после введения препарата, достигло максимума через 8 ч, затем начало постепенно снижаться, возвращаясь к исходному уровню через 12-16 ч. Содержание астаксантина в сыворотке крови крыс каждой экспериментальной группы значительно отличалось в моменты времени 0,5, 1, 2, 4, 8, 10 и 12 ч. Через 0,5, 1, 2, 4, 8, 10 и 12 ч наблюдались значительные различия в уровне астаксантина в сыворотке крови между разными группами (P<0,05). Пиковое содержание астаксантина в сыворотке крови крыс в группе астаксантина составило (1,89±0,26) мкг/л; пиковое содержание астаксантина в сыворотке крови крыс в группе рыбьего жира+астаксантина составило (3,94±0,27) мкг/л, что в 2,08 раза выше, чем в группе астаксантина (P<0,05); пиковое содержание астаксантина в сыворотке крови крыс в группе жира антарктического криля+астаксантина составило (15,8±2,09) мкг/л, что в 8,37 раза выше, чем в группе астаксантина. Пиковое содержание астаксантина в сыворотке крови крыс в группе "жир антарктического криля+астаксантин" составило (15,8±2,09) мкг/л, что в 8,37 раза выше, чем в группе астаксантина (P<0,05), и в 4,02 раза выше, чем в группе "рыбий жир+астаксантин" (P<0,05).

 

2.2.4 Оценка биодоступности Значения AUC0-t содержания астаксантина в сыворотке крови крыс представлены в таблице 4. Биодоступность астаксантина у крыс разных экспериментальных групп значительно отличалась (P<0,05). В группе астаксантина значение AUC0-t составило (14,4±0,21) мкг-ч/л; в группе рыбьего жира + астаксантин значение AUC0-t составило (23,4±0,46) мкг-ч/л, что в 1,63 раза выше, чем в группе астаксантина (P<0,05); в группе жира антарктического криля + астаксантин значение AUC0-t составило (108,4±2,34) мкг-ч/л, что в 7,55 раза выше, чем в группе астаксантина. В группе масло антарктического криля + астаксантин значение AUC0 -t составило (108,4 ± 2,34) мкг-ч/л, что в 7,55 раза выше, чем в группе астаксантина (P<0,05), и в 4,63 раза выше, чем в группе рыбий жир + астаксантин (P<0,05).

 

3 Обсуждение

Согласно современным данным [14-15, 18, 23, 27-30], процесс переваривания и всасывания натурального астаксантина выглядит следующим образом: астаксантин в пищевой матрице постепенно высвобождается под действием жевательных средств, перистальтики желудка и пищеварительных ферментов, высвобожденный астаксантин (в свободном или этерифицированном состоянии) смешивается с липидами и заключен в липидные капли в желудке, а затем поступает в тонкий кишечник под действием пищеварительных ферментов, таких как панкреатическая липаза и изомераза, После попадания в тонкий кишечник под действием пищеварительных ферментов, таких как панкреатическая липаза, изомераза и т.д., астаксантин высвобождается из липидных капель, астаксантин в этерифицированном состоянии одновременно переваривается в свободное состояние [23, 28-29], а затем эмульгируется с жирными кислотами, моноацилглицеринами, фосфолипидами, желчными солями и т.д., образуя смешанные мицеллы; затем смешанные мицеллы, обернутые вокруг свободного астаксантина, всасываются в эпителиальные клетки тонкого кишечника путем простой диффузии, пассивной диффузии или транспорта холестерола и т.д. [30]. Впоследствии свободные мицеллы астаксантина поглощаются эпителиальными клетками тонкого кишечника путем простой диффузии, пассивной диффузии или транспорта холестерина[30] . Внутри тонкого кишечника астаксантин инкапсулируется в коэломные частицы, которые попадают в лимфатическую систему, затем в кровь и в конечном итоге в органы-мишени, такие как печень, сердце и селезенка[31]. Красные водоросли в настоящее время признаны предпочтительным пищевым ингредиентом для получения натурального астаксантина, который в основном находится в этерифицированной форме, с небольшим количеством астаксантина в свободной форме [14, 23].

 

В настоящем исследовании содержание астаксантина в кишечном содержимом крыс достигало максимума через 2-4 ч, в ворсинках тонкой кишки - через 4 ч, а в сыворотке крови - через 8 ч после введения экстракта астаксантина с помощью гаважа. Динамика переваривания и всасывания в основном соответствовала результатам Zhou QX et al[23] и Coral-Hinostroza et al[28].

Природные каротиноиды, как правило, плохо усваиваются в пищеварительном тракте [15, 17], и добавление липидов в процесс приема является эффективным способом улучшить ситуацию [18-20, 32]. В настоящем исследовании введение крысам диетических липидов морского происхождения, таких как жир антарктического криля или рыбий жир, в сочетании с экстрактами астаксантина из красной водоросли Rhodophyta rainforestris привело к значительному повышению уровня астаксантина в сыворотке крови и значения AUC0-t у крыс, что указывает на то, что жир антарктического криля или рыбий жир значительно повысили биодоступность природного астаксантина у крыс. В пищеварительной среде in vivo физические, химические, биологические и другие факторы вместе, влияние компонентов пищевой матрицы на молекулярную конформацию, растворимость, стабильность и т.д., являются основной причиной изменения питательных свойств каротиноидов [32]. В настоящем исследовании обнаружение астаксантина в кишечном содержимом крыс как в группе антарктического криля + астаксантин, так и в группе рыбьего жира + астаксантин было значительно выше, чем в группе астаксантина, и предполагается, что эффект антарктического криля и рыбьего жира в улучшении биодоступности астаксантина тесно связан с их способностью повышать растворимость астаксантина и его стабильность в желудке и кишечном тракте. Кроме того, было высказано предположение, что различные типы пищевых липидов по-разному влияют на биодоступность каротиноидов [19, 33-34].

 

В данном исследовании использовался рыбий жир триглицеридного типа, а триглицериды перевариваются до моноацилглицеридов панкреатической липазой in vivo, что может увеличить скорость мицелляризации каротиноидов [34] и способствовать эффективному всасыванию каротиноидов в эпителиальных клетках тонкого кишечника. Этот вывод подтверждается результатами изменения содержания астаксантина в ворсинках тонкого кишечника крыс, полученными в настоящем исследовании. Интересно отметить, что жир антарктического криля более эффективен в повышении биодоступности астаксантина, чем триглицеридный рыбий жир. Помимо триглицеридов, содержание фосфолипидов в жире антарктического криля достигает более 40%, а фосфолипиды являются важными структурными веществами, которые эмульгируют и образуют смешанные мицеллы, обволакивая другие пищевые компоненты в процессе пищеварения в организме, и хорошо зарекомендовали себя в создании мицеллярных транспортных систем для повышения биодоступности жирорастворимых пищевых функциональных факторов, не растворимых в воде лекарств и т.д. [35-37]. Высокое содержание фосфолипидов в жире антарктического криля является питательной характеристикой, определяющей его превосходство над рыбьим жиром в повышении биодоступности астаксантина, и эта питательная характеристика также обеспечит широкие возможности для разработки других производных на основе жира антарктического криля.

 

4 Заключение

Липиды морского происхождения, такие как масло антарктического криля или рыбий жир, могут значительно повысить биодоступность астаксантина из красных водорослей у крыс, причем масло антарктического криля является более эффективным. Механизмы повышения биодоступности натурального астаксантина с помощью масла криля включают: с одной стороны, масло криля может улучшить растворимость астаксантина и его стабильность в желудке и кишечном тракте; с другой стороны, масло криля содержит триглицериды и высокое содержание фосфолипидов, пищеварительные ферменты, перевариваемые организмом, могут увеличить скорость микроцеллюлозы астаксантина, чтобы способствовать эпителиальным клеткам тонкого кишечника для его эффективного поглощения. Эти два механизма заслуживают изучения и подтверждения. Результаты настоящего исследования показывают, что разработка функциональных формул масла антарктического криля и астаксантина вполне осуществима и будет эффективно направлять развитие производных, связанных с маслом антарктического криля, что имеет большое значение для обеспечения развития индустрии антарктического криля в Китае.

 

Ссылки:

[1] LIU Yongxin, LI Menglong, FANG Hui, et al.  Ресурсный профиль и экосистемная функция антарктического криля [J].  Journal of Aquatic Sciences, 2019, 32(1): 57-62.

[2] Zuo Qing , Zuo Hui .  Состояние и перспектива развития антарктического криля[J].  Пища и пищевая промышленность, 2019, 26(4): 13-16.

[3] XIE D , GONG M , WEI W , et al. Масло антарктического криля (Euphausia superba): всесторонний обзор химического состава, технологий экстракции, пользы для здоровья и текущего применения[J]. Масло антарктического криля (Euphausia superba): комплексный обзор химического состава, технологий экстракции, пользы для здоровья и современного применения[J].  Compre- hensive Reviews in Food Science and Food Safety, 2019 , 18(2): 514-534.

[4] BURRI L , BERGE K , WIBRAND K , et al. Differ- ential effects of krill oil and fish oil on the hepatic transcriptome in mice [J].  Frontiers in Genetics, 2011, 2: 1-8.

[5] SUN D , ZHANG L , CHEN H , et al. Влияние масла антарктического криля на метаболизм липидов и глюкозы у мышей C57BL/6J, которых кормили диетой с высоким содержанием жира [J].  Lipids in Health and Disease, 2017, 16(1): 218.

[6] VIGERUST N F , BJØRNDAL B , BOHOV P , et al. Krill oil versus fish oil in modulation of inflamma- tion and lipid metabolism in mice transgenic for TNF-α [J] .  European Journal of Nutrition, 2013, 52 (4): 1315-1325.

[7] HIRATSUKA S , KOIZUMI K , OOBA T , et al. Ef- fects of dietary docosahexaenoic acid connecting phospholipids on the learning ability and fatty acid composition [J]. Состав жирных кислот мозга [J].  Journal of Nutritional Science and Vitaminology, 2009, 55(4): 374-380.

[8] WIBRAND K , BERGE K , MESSAOUDI M , et al. Улучшение когнитивных функций и антидепрессантоподобный эффект после приема крилевого масла у крыс [J] . Lipids in Health and Disease, 2013, 12(1): 6.

[9] ROCKWAY S. Композиции, включающие экстракты криля и конъюгированную линолевую кислоту, и способы их применения : патент США 7666447 [P].  2010-02-23.

[10] DEROHANES E , RAYL K , SIWEK M , et al. Co- Q10, масло криля и витамин D: Патентная заявка США 15/549063 [P].  2018-03-29.

[11] COSTANZO M , CESI V , PALONE F , et al. Krill oil, vitamin D and Lactobacillus reuteri cooperate to reduce gut inflammation [J]. Полезные микробы, 2018, 9(3): 389-399.

[12] NAGUIB Y M A. Антиоксидантная активность астаксана тонкого и родственных каротиноидов[J].  Journal of Agricultur- al and Food Chemistry, 2000, 48(4): 1150-1154.

[13] GÓMEZ -ESTACA J , CALVO M M , ÁLVAREZ - ACERO I , et al. Характеристика и стабильность хранения эфиров астаксантина, профиль жирных кислот и α - токоферола липидного экстракта из отходов креветок (L. van- namei) с потенциальным применением в качестве пищевого ингредиента[J]. Токоферол липидного экстракта из отходов креветок (L. van- namei) с потенциальным применением в качестве пищевого ингредиента[J].  Пищевая химия, 2017, 216: 37-44.

[14] RANGA RAO A , RAGHUNATH REDDY R L, BASKARAN V, et al. Характеристика каротиноидов микроводорослей с помощью масс-спектрометрии и их биодоступность и антиоксидантные свойства в крысиной модели [J].   Journal of Agricultural and Food Chem- istry, 2010, 58(15): 8553-8559.

[15] ZHOU Qingxin, LIU Tingting, YANG Lu.  Прогресс в области источника астаксантина, биоэффективности, абсорбции и метаболизма[J].  Food Research and Development, 2017, 38(16): 214-219.

[16] CONG X Y , ZHANG H Z. Последние достижения в области источников, биологической активности и применения астакс-антина[J].  Международный журнал наук, 2019, 8(3): 31-34.

[17] VIERA I , PÉREZ -GÁLVEZ A , ROCA M. Bioac- cessibility of marine carotenoids [J].   Marine Drugs, 2018 , 16(10): 397.

[18] RAO A R , BASKARAN V , SARADA R , et al. In vivo bioavailability and antioxidant activity of carotenoids from microalgal biomass-A repeated dose study[ J].  Food Research International, 2013, 54(1): 711-717.

[19] COLLE I J P , VAN BUGGENHOUT S , LEMMENS L , et al. Тип и количество липидов, присутствующих во время пищеварения, влияют на биодоступность in vitro ликопина из сырой мякоти томатов [J]. ликопина из сырой томатной мякоти [J].   Food Re- search International, 2012, 45(1): 250-255.

[20] FAILLA M L , CHITCHUMRONCHOKCHAI C, FERRUZZI M G , et al. Ненасыщенные жирные кислоты способствуют биодоступности и базолатеральной секреции каротиноидов и α-токоферола клетками Caco -2 [J]. Food & Function, 2014, 5(6): 1101-1112.

[21] WANG Jiahui, LIU Chunhua, REN Bingxing, et al.  Влияние фосфолипидов с различным составом жирных кислот на пищеварение и всасывание у крыс[J].  China Oil & Fats, 2013, 38(8): 51-54.

[22] KHACHIK F , BEECHER G R , GOLI M B , et al. Разделение и количественное определение каротиноидов в плазме крови человека [J].  Методы в энзимологии, 1992, 213: 205-219.

[23] ZHOU Qingxin , YANG Lu , XU Jie .  Исследование пищеварительных и абсорбционных характеристик эфиров астаксантина из красных водорослей[J].  Journal of Food Science and Technology of China, 2019, 19(4): 125-132.

[24] SUN Weihong, XING Lihong, LEN Kailiang, et al.  Определение астаксантина в антарктическом криле и его продуктах с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии[J].  Journal of Food Safety and Quality Inspection, 2017, 8(4): 1248-1253.

[25] Lai Jun, Liao Zhenggen, Yang Mingfu, et al.  Прогресс биодоступности[J].  Китайский журнал экспериментальной рецептуры, 2010, 16(18): 226- 229.

[26] BIEHLER E , BOHN T. Methods for assessing as- pects of carotenoid bioavailability [J].   Current Nutri- tion & Food Science, 2010, 6(1): 44-69.

[27] OLSON J A. Поглощение, транспорт и метаболизм каротиноидов в организме человека[J].  Pure and Applied Chem- istry, 1994, 66(5): 1011-1016.

[28] CORAL - HINOSTROZA G N , YTRESTØYL T , RUYTER B , et al. Plasma appearance of unesteri- fied astaxanthin geometrical E/Z and optical R/S i- somers in men получавших разовые дозы смеси оптических 3 и 3′ R/S изомеров жирных а-цил диэфиров астаксантина[J].  Comparative Biochemistry and Physi- ology Part C: Toxicology & Pharmacology, 2004, 139(1/2/3): 99-110.

[29] FUKAMI H , NAMIKAWA K , SUGIURA -TOMI- MORI N , et al. Химический синтез моноэфира и диэфира астаксантина n -октановой кислоты и оценка их пероральной абсорбируемости [J].   Journal of Oleo Science, 2006, 55(12): 653-656.

[30] YONEKURA L , NAGAO A. Кишечная абсорбция пищевых каротиноидов [J] .   Molecular Nutrition & Food Research, 2007, 51(1): 107-115.

[31] Zhou Q. X. .  Исследование характеристик переваривания и всасывания эфиров астаксантина и их гомеостаза [D]. Циндао: Океанический университет Китая, 2015.

[32] DESMARCHELIER C , BOREL P. Обзор факторов, определяющих биодоступность каротиноидов: от диетических факторов до генетических вариаций хозяина [J].  Trends in Food Science & Technology, 2017, 69: 270-280.

[33] NAGAO A , KOTAKE -NARA E , HASE M. Влияние жиров и масел на биодоступность каротиноидов и витамина Е в овощах[J].  Bioscience, Biotech- nology, and Biochemistry, 2013, 77(5): 1055-1060.

[34] HUO T , FERRUZZI M G , SCHWARTZ S J , et al. Влияние жирноацильного состава и количества триглицеридов на биодоступность пищевых каротиноидов [J ].   Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2007 , 55(22): 8950-8957.

[35] RATHORE P , SWAMI G. Planterosomes: a poten- tial phyto-phospholipid carriers for the bioavailability enhancement of herbal extracts [J].  International Jour- nal of Pharmaceutical Sciences and Research, 2012 , 3(3): 737.

[36] LI J , WANG X , ZHANG T , et al. A review on phospholipids and their main applications in drug delivery systems [J].  Asian Journal of Pharmaceutical Sciences, 2015, 10(2): 81-98.

[37] KUCHE K , BHARGAVI N , DORA C P , et al. Drug-phospholipid complex-a go through strategy for enhanced oral bioavailability [ J ] .   AAPS Pharm Sci Tech, 2019, 20(2): 43.